세포 및 분자 이미징 코어

통합 신경과학 COBRE 센터의 세포 및 분자 이미징(CMI) 핵심 시설의 임무는 리노 네바다 대학교(University of Nevada, Reno)에서 추가 연구를 위한 미디어 준비뿐만 아니라 생체 분자의 세포 및 분자 이미징을 수행하는 데 필요한 인프라와 리소스를 제공하는 것입니다( UNR). 핵심 시설은 이과대학 생물학과 Fleischmann Lifesciences 건물 3층에 위치해 있습니다.

CMI 코어 시설은 살아있는 뇌와 전체 동물의 심부 조직 스캐닝을 위한 새로운 Scientifica HyperScope 2광자 이미징 시스템, 캡처가 가능한 LIGHTNING이 장착된 Leica SP8 공초점 현미경 시스템을 포함한 최첨단 장비에 대한 액세스를 제공합니다. 세포 세부 정보 및 120nm 이하의 해상도로 역학 관찰, Leica Thunder 3D 조직 정립 현미경, 배아, 기관 및 Drosophila 및 C. elegans와 같은 작은 유기체를 이미지화하기 위한 Leica Thunder 모델 유기체 입체 현미경, 노던 블롯용 GE Phosphoimager , 웨스턴 블랏용 BioRad ChemiDoc, 정밀 및 정량적 PCR을 위한 BioRad Real-Time PCR 장비 2대, 자동화된 PCR 설정을 위한 QIAgility, GeneSys 180 UV/Vis 분광 광도계 및 Quibit 4 형광계가 있습니다.

코어의 추가 기능에는 모델 유기체로 사용되는 Drosophila 및 C. elegans의 사육을 위한 배지 준비 도구 및 리소스가 포함됩니다.

위치: FA 318(문 열쇠 접근 필요)

2광자 현미경 검사법은 세포 신경과학에 없어서는 안될 도구가 되었으며, 시험관 내 및 생체 내 살아있는 뇌와 전체 동물의 세포에 대한 고해상도 형광 이미징을 가능하게 합니다. HyperScope 시스템은 Mai-Tai eHPDS 광범위하게 조정 가능한 Ti-sapphire 레이저(690-1040nm), 다중 대물렌즈(16x, 20x 및 40x)를 갖춘 맞춤형 제작 2광자 현미경이며 Thorlabs 브레드보드 위에 세워져 있고 진동 방지 테이블. Scientifica SciCam Pro CCD 카메라를 사용하면 24fps(전체 해상도) 및 40fps(비닝 2 x 2) 비디오 프레임 속도의 기능적 이미징을 수행할 수 있습니다. 검출기 어셈블리에는 적색 편이 PMT 1개와 GaAsP PMT 모듈 1개가 포함되어 있으며, GFP(470/40x 소멸, 525/50m 방출) 및 mCherry(560/40x 소멸, 630/75m 방출)용 필터 세트가 포함된 표면형광 이미징이 포함되어 있습니다. 이미징 경로의 스캔 미러는 필요에 따라 여러 구성으로 배열될 수 있습니다. 최대 3개의 미러를 직렬로 사용하면 갈보/갈보(GG), 공진/갈보(RG) 또는 공진/갈보/갈보(RGG) 배열 중에서 선택할 수 있습니다. 현미경에는 진동 없는 움직임을 보장하기 위해 매우 부드러운 Z축 드라이브가 장착되어 있으며, Z축은 최소 단계 크기 0.1mm의 z-스택을 획득하기 위한 소프트웨어로 제어됩니다. Piezo Z축 대물렌즈 포지셔너를 추가하면 최대 400mm의 볼륨 이미징이 가능합니다. 현미경은 서브스테이지 광학 장치 및 라이저 블록을 제거하여 쉽게 구성할 수 있으며 시험관 내 응용과 생체 내 응용 사이에서 전환할 수 있습니다. 시스템은 생물학적 시료의 빛과 소음 공해를 방지하기 위해 암막 케이지에 둘러싸여 있습니다.

이 플랫폼에는 수상 경력이 있는 Scientifica SciScan 수집 소프트웨어가 포함되어 있어 사용자가 SciScan을 LabView 및 ScanImage와 같은 맞춤형 애플리케이션과 쉽게 통합할 수 있습니다. Scientifica에서 사용하는 ScanImage 소프트웨어 인터페이스(Vidrio Technologies)는 HHMI Janelia Farm에서 특별히 신경 과학 응용 분야를 위해 개발했으며 시장에서 가장 진보된 2광자 레이저 스캐닝 소프트웨어로 간주됩니다.

Scientifica HyperScope의 주요 고유 기능은 다음과 같습니다.

위치: FA 324

Leica TCS SP8 LIGHTNING 공초점을 사용하면 공초점 현미경의 부회절 측면 해상도를 활용하는 초해상도 획득으로 이미지 정보를 추출할 수 있습니다. STED 초해상도 현미경 기능에 가까운 120nm까지의 해상도로 세포의 세부 사항을 포착하고 역학을 관찰할 수 있습니다. 수직 공초점은 여러 레이저 라인(다이오드 405, 파란색 488, 녹색 552, 빨간색 638 nm)을 사용하여 최대 3개의 감지 채널(PMT 2개, HyD 1개)에서 동시에 수집할 수 있습니다. 공초점은 기존 탠덤 스캐너(8kHz), Super Z-galvo 스테이지 유형 S, 다중 대물렌즈(10x, 20x, 25x, 40x, 63x)로 구성되며 진동 방지 테이블 위에 서 있습니다. 공초점은 Leica LAS-X 소프트웨어와 30인치 모니터가 장착된 컴퓨터 워크스테이션에 연결됩니다.